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熒光定量PCR儀的數據分析從哪些方面入手
點擊次數:411 更新時間:2022-10-27
    熒光定量PCR儀,由熒光定量系統和計算機組成,用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數據進行正?;幚韥韽浹a背景熒光的差異。正?;罂梢栽O定域值水平,這就是分析熒光數據的水平。
  在qPCR進程中,隨著產物的積累,熒光信號的強度等比加強。每經過一次循環,收集一次熒光信號,即可得到一個熒光擴增曲線,根據熒光強度的變化即可監測產物量的變化。熒光擴增曲線可分為三個階段,即熒光背景信號階段、熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光信號指數擴增階段,PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,因此可以在該階段進行定量分析。為了便于對所檢測樣本進行比較,在指數期需要設定一個熒光信號的閾值。檢測到的熒光信號超過閾值則被認為是真正的信號。熒光信號由本底進入指數增長階段的閾值所對應的循環次數稱為Ct值。模板的Ct值與其起始拷貝數的對數存在線性關系,起始拷貝數越多,則Ct值越小利用已知起始拷貝數的標準品及其相應的Ct值可繪制出標準曲線,測得未知樣品的Ct值后,根據標準曲線便可準確計算出該樣品的起始拷貝數。
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